4. PROCEDIMENT EXPERIMENTAL
4.6. Creixement d'Escherichia coli en un medi mínim i complex
4.6.1. Creixement en Medi mínim
Materials
- 2 flascons amb tap i connexions per les bombes peristàltiques.
- Mostrejador.
- 2 xeringues de 10ml, una de normal i l’altre amb rosca interior a la punta per adaptar-la al port del mostrejador.
- 20 tubs d’assaig amb rosca i tapa.
Equips
Reactius
- 250 ml d’àcid clorhídric 0.01M.
- 250 ml d’hidròxid de sodi 0.01M
- Aigua destil·lada.
- 2 L de medi mímin preparat segons l'apartat de medis de cultiu.
- Inòcul preparat segons l'apartat de preparació de l'inòcul.
Procediment
Es prepara el reactor segons l'apartat de posta a punt equipament. Seguidament s’introdueix 1,5 L del medi mínim de cultiu a l’interior del reactor.
A la vegada es preparen i es dipositen els flascons auxiliars del reactor (control de pH), 250 ml d’àcid clorhídric 0,01M i 250ml d’hidròxid de sodi 0,01M, i es connecten a les bombes peristàltiques.
S’introdueixen els següents valors dels set points de al panell de comandament:
- pH = 7
- Cabal d'aire = 1 lpm
- RPM = 300
- Temperatura = 30 ºC
Un cop s’estabilitzen els paràmetres s’introdueixen en el reactor amb una proveta, 30 mL del cultiu preparat segons l’apartat de preparació de l’inòcul i s’inicia la recopilació de dades per part del software Iris (mirar l'apartat de Funcionament del Software).
Inmediatament a l’addició de l’inòcul i després en intervals de 2 h, es prenen mostres del cultiu per a la determinació de la densitat òptica i concentració de substrat segons els apartats de seguiment de la biomassa i seguiment del substrat.
Elaboració de resultats
- Consultar al següent apartat per veure com treballar amb l'arxiu excel de les dades guardades a l'ordinador.
- Realitzar els gràfics de densitat òptica, concentració de substrat, % oxigen dissolt i consum d’àcid i base respecte el temps.
- Realitzar el gràfic de Ln de la concentració de proteína respecte del temps tal i com es mostra a l'apartat de càlcul de la taxa de creixement bacterià.
-
Calcular la taxa de creixement mitjançant l'equació següent (Consultar apartat de càlcul de la taxa de creixement bacterià):
4.6.2. Creixement en Medi complex
El procediment a seguir és igual al descrit en l’apartat de creixement en medi mínim utilititzant en aquest cas medi complex. En aquest cas, però, la presa de mostres per la determinació de densitat òptica es fa cada hora.
Es prepara el reactor segons l'apartat de posta a punt equipament.
S’introdueix 1,5 L del medi complex de cultiu a l’interior del reactor.
Es dipositen els flascons auxiliars del reactor (control de pH), 250 ml d’àcid clorhídric 0,01m i 250ml d’hidròxid de sodi 0,01m, i es connecten a les bombes peristàltiques.
S’introdueixen els següents valors dels set points de al panell de comandament:
- pH = 7
- Cabal d'aire = 1 lpm
- RPM = 300
- Temperatura = 30 ºC
Un cop s’estabilitzen els paràmetres s’introdueix els 30 ml d’inòcul al reactor i s’inicia la recopilació de dades per part del software Iris (mirar l'apartat de Funcionament del Software).
Elaboració de resultats
- Consultar al següent apartat per veure com treballar amb l'arxiu excel de les dades guardades a l'ordinador.
- Realitzar el gràfic de densitat òptica, % d’oxigen i consum d’àcid i base respecte el temps.
- A partir de la relació densitat òptica - proteína (veure apartat de càlcul de la taxa de creixement bacterià), realitzar el gràfic de la concentració de proteína respecte el temps.
- Realitzar el gràfic de Ln de la concentració de proteína respecte del temps tal i com es mostra a l'apartat de càlcul de la taxa de creixement bacterià.
- Calcular la taxa de creixement mitjançant l'equació següent (Consultar apartat de càlcul de la taxa de creixement bacterià).
